분자생물학실험-동물세포배양(cell culture)
00.00
음성: CO2 인큐베이터에 배양중인 세포주를 꺼냅니다. CO2 인큐베이터는 온도와 기체의 손실을 막기 위해서 2중문으로 되어 있습니다.
00.15
자막: 온도는 37℃, CO2 농도는 5%를 유지하고 있습니다.
00.25
음성: 배양중인 세포의 상태를 현미경으로 확인합니다. 배양액에 둥둥 떠다니거나 곰팡이에의 오염 등은 없는지도 확인합니다.
자막: 바닥에 붙어 자라는지, 너무 조밀하지 않은지 등을 체크.
00.49
음성: 배양액 용기와 배지 용기 등을 70% 알코올을 뿌려 소독해줍니다.
01.02
음성: 클린벤치의 모습입니다. 사용하지 않는 중에는 UV lamp를 켜둡니다.
자막: UV lamp를 켜두는 이유: UV 광선이 닿는 곳에 있는 미생물들을 죽이기 위해서. UV 광선이 직접 닿지 않는 곳은 영향을 미치지 않음(표면을 뚫고 지나가지 못함)
01.08
음성: 클린벤치의 아래 바깥 쪽에는 사용한 배지액을 모아두는 용기가 있습니다.
01.14
음성: 클린벤치 안으로 들어가는 모든 물건은 알코올을 뿌려주어야 합니다. 이미 클린벤치 안에 있던 물품들도 실험 전 알코올을 뿌려주고 닦아주어 미생물 등에의 오염을 피해야합니다.
자막: 손 역시 알코올을 충분히 뿌려주어 손에 존재하는 미생물에의 오염을 없애주어야 하며, 알코올을 뿌려주었더라도 클린벤치 바깥으로 노출되게 되면 다시 알코올을 뿌려주어야 합니다.
02.03
음성: 알코올 램프는 실험 내내 켜둡니다.
자막: 방금 전에 손에 뿌린 알코올 등이 채 마르기 전에 라이터를 켜지 않도록 주의!
02.17
음성: 파스퇴르 파이펫을 하나 꺼내고 알코올 램프에 살짝 대어준 후 석션기에 연결합니다.
자막: 지금 보이는 가는 유리로 된 관을 파스퇴르 파이펫이라고 합니다.
자막: 용기의 마개를 열고 닫을 때에도 알코올 램프에 살짝 대주는 모습을 볼 수 있습니다.
02.43
음성: 클린벤치 안에 일단 들어간 손은 실험이 끝날 때까지 나오지 않는 것이 좋습니다.
자막: 아래쪽에 발을 이용하여 기구의 스위치를 조작합니다.
02.53
음성: 지금은 석션기를 이용해서 갈아주어야 할 배지를 뽑아내는 과정입니다. 배양액을 너무 급하게 뽑아내면 배양 중인 세포들이 같이 빠져나올 수 있으므로 천천히 조심스럽게 석션합니다. 치과에 가면 입안의 침을 제거해주는 기구를 생각하시면 됩니다. 파스퇴르 파이펫에 연결된 고무관을 통해 배양액이 이동하고 있습니다.
자막: 배양액을 뽑아내면 세포는 건조한 환경에 노출되게 되므로 실험을 조심스럽지만 빠르게 진행해야 합니다.
05.40
음성: 파스퇴르 파이펫의 끝 부분 등은 클린벤치 안의 바닥이나 기구에 닿지 않도록 주의합니다.
자막: 클린벤치 안이 깨끗한 환경이지만 만약에 그 안의 기구에 닿았다면 바로 새 파이펫으로 교체해서 사용하는 것이 좋습니다.
05.44
음성: 석션기를 끄고 37도로 데워놓았던 워싱 버퍼의 마개를 엽니다.
06.00
음성: 파이펫 에이드에 새 파이펫을 끼운 후 워싱버퍼를 일정량 취하고, 배양액을 제거해주었던 배양 용기에 넣어줍니다.
자막: 파이펫에이드: 전기 펌프를 이용해서 액체를 흡입/배출해주는 장치. 10~20ml 사이의 용량을 취하거나 버릴 때 편리함.
06. 36
음성: 세포에 직접적으로 부어주는 것이 아니라 자연스럽게 배양용기 안으로 흘려줍니다.
자막: 배양용기 바닥에 붙어있는 세포들이 떨어질 수 있고 물리적인 충격을 받을 수 있기 때문.
06.53
음성: 워싱버퍼를 이용해서 세포와 용기 내부를 씻어주는 과정입니다. 다 빠져나가지 못한 폐물질들을 씻어준다고 생각하면 됩니다.
자막: 가능한 모든 과정에 알코올 램프를 이용하여 용기 입구나 마개를 멸균해줍니다.
07.19
음성: 다시 석션기를 켜고 워싱 버퍼를 제거해줍니다. 지금은 워싱해주는 과정이므로 배양액을 제거할 때 사용했던 파스퇴르 파이펫을 교체하지 않고 그대로 사용해도 무방합니다.
08.09
음성: 37도로 데펴놓았던 배양액의 마개를 열어줍니다. 오염을 확실히 방지하기 위해 마개 주변에 테잎을 둘러두었던 것을 알 수 있습니다.
08.29
음성: 새 배양액을 담아야 하므로 새로운 파이펫으로 교체해서 사용해야 합니다. 적정량의 배양액을 취한 후 배양용기에 조심스럽게 넣어줍니다.
09.20
음성: 배양용기의 마개를 닿고 테이프를 이용해 한번 더 밀봉해줍니다. 이처럼 세포를 이용한 실험은 항상 박테리아나 곰팡이 등에의 오염을 막는 과정이 필수적입니다.
10.00
음성: 배양용기에 배지를 교체해준 날짜와 실험자 이름을 적어줍니다.
자막: 실험실에서는 같은 기구나 세포주를 여러 명이 같이 이용하므로 실험날짜와 이름을 반드시 적어주어야 합니다.
10.15
음성: 클린벤치를 나올 때에는 유리문을 아래까지 내려주어 외부와의 접촉을 최소화시켜줍니다.
10.22
음성: 현미경을 이용해서 세포 상태를 확인합니다.
자막: 세포들의 부착상태, 밀도 등을 확인하고 이물질(부유물) 등은 없는지 등을 체크합니다.
10.45
음성: 다시 CO2 인큐베이터에 넣어주면 실험이 끝납니다.
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